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ELISA检测HBsAg室内质控血清的制备和应用

2018-04-06 12:00:02    作者:admin    www.5alw.com
【摘要】  目的  为了提高HBsAg检测质量,自制BHsAg室内质控血清,以降低假阳性、假阴性的出现率,相应提高检测的准确度。方法  采用不同厂家的诊断试剂检测,将质控血清分装放在不同温度下保存后多次测定。结果  经统计处理三者之间无显著差异(P>0.05)。结论  自制HBsAg室内质控血清稳定,易保存,能反映常规检测精密度,该质控血清适宜作HBsAg室内质控使用。
【关键词】  HbsAg  室内质控  ELISA
        乙型肝炎是我国发病率较高的疾病之一,除现症病人外约有10%的人群为乙肝携带者,其临床诊断主要依赖于临床检验结果,而实际工作中HBsAg检测结果往往出现假阳性、假阴性,给患者造成误珍,延误诊治时间[1]。鉴于此,笔者以卫生部临床检验中心提供的HBsAg临界值血清为模板,然后自制HBsAg的临界值质控血清,并应用于常规条件下的室内质控,大大降低了假阳性、假阴性的发生。现报道如下。
        1 材料与方法
        1.1 材料
        1.1.1标本收集  用无菌管收集临床与检验确诊为“乙型病毒性肝炎患者”的血清,外观需无溶血、脂血、黄疸、无污染、清晰透明。收集20份左右,约10ml,充分混匀,分装后置4℃和-20℃冰箱保存备用。
        1.1.2参考血清  卫生部临检中心提供的乙型病毒临界值血清,批号“0805”,含量2ng/ml。
        1.1.3试剂与仪器  上海实业科华生物技术有限公司提供的HBsAg ELISA检测试剂盒;北京万泰生物药业股份有限公司提供的HBsAg ELISA检测试剂盒;DLA-960酶标仪;AMPW自动洗板机;YDME微量振荡器。
        1.2 实验与方法
        1.2.1确定稀释度  用灭活2H2O稀释混合血清成不同稀释倍数,严格按照试剂盒操作说明,常规条件下与卫生部临检中心提供临界值血清同测,测得1/400倍时其OD、S/CO值与卫生部临检中心提供的临界值血清接近。
        1.2.2分装备用  将混合血清作1/400倍的大批量稀释,其中小牛血清占15%,二甲亚砜占0.5%,叠氮钠占0.3%,混匀灭菌分装、冷藏和冰冻保存。
        1.2.3标本处理  取4℃和-20℃冰箱保存的质控血清置56℃10小时灭活后离心沉淀,过滤除菌。
        2 实验结果 
        2.1 取1/400倍稀释血清连续20次重复测定,两种试剂两种批号的结果差异不大
        2.2 将4℃冷藏一周和-20℃冷冻一月的稀释血清随机抽取质控血清,连续检测20次
        2.3 统计学方法  所有指标用OD均值X,SD的均值S,以X±S表示,采用SpSS10.0软件统计,比较采用配对t检验。
        3 讨论
        3.1 在实验室常规操作进行中测得S/CD均值为1.15,保证了实验的可靠性,且该实验质控血清显示结果时颜色较浅,但肉眼仍可与阴性对照明显区别。
        3.2 按我国临床实验室条件和试剂生产水平,卫生部HBsAg(ELISA)临界值血清标准为2ng/mL]。其OD值在0.056左右,S/CO均值为1.15,SD为0.002593,CV为4.6%,4℃和-20℃保存后连续检测结果0D值在0.059左右,SD值0.002900左右,CV为5.3%左右,S/CO的均值为1.16。说明该自制质控血清较稳定。
参 考 文 献
[1]赵祥胜.乙型肝炎表面抗原室内质控血清制备及质量保证的控讨,武汉医学杂志,1995,19(3):191-192
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